Diagnóstico y tratamiento quirúrgico de una paciente con una neoplasia trofoblástica gestacional / Diagnosis and surgical treatment of a patient with gestational trophoblastic neoplasia

Resumen ANTECEDENTE: La neoplasia trofoblástica gestacional forma parte del grupo de afecciones derivadas de la proliferación anómala del trofoblasto con capacidad para invasión y metástasis. CASO CLÍNICO: Paciente de 42 años, asintomática, con sospecha ecográfica de mola hidatiforme. El legrado uterino y el estudio anatomopatológico confirmaron el diagnóstico de mola hidatiforme completa. Con la cuantificación consecutiva de tres elevaciones de la β-HCG se diagnosticó: neoplasia trofoblástica gestacional. Se estadificó en estadio I, bajo riesgo y ante el deseo genésico satisfecho la paciente aceptó la histerectomía más salpingectomía bilateral. En el seguimiento posterior la paciente se encontró asintomática, con determinaciones seriadas de b-HCG negativa y ecografías vaginales sin hallazgos. CONCLUSIÓN: La histerectomía con salpingectomía bilateral puede ser el tratamiento definitivo en casos seleccionados de neoplasia trofoblástica. La evidencia disponible es escasa, por lo que es necesario seguir investigando en este campo.

Abstract BACKGROUND: Gestational trophoblastic neoplasia is one of a group of conditions resulting from abnormal trophoblast proliferation with capacity for invasion and metastasis. CLINICAL CASE: 42-year-old asymptomatic patient with ultrasound suspicion of hydatidiform mole. Uterine curettage and anatomopathological study confirmed the diagnosis of complete hydatidiform mole. With the consecutive quantification of three elevations of β-HCG a diagnosis of gestational trophoblastic neoplasia was made. It was staged as stage I, low-risk, and the patient agreed to hysterectomy plus bilateral salpingectomy. At subsequent follow-up the patient was found to be asymptomatic, with negative serial determinations of β-HCG and vaginal ultrasound scans without findings. CONCLUSION: Hysterectomy with bilateral salpingectomy may be the definitive treatment in selected cases of trophoblastic neoplasia. The available evidence is scarce and further research is needed in this field.

Comparative analysis of trophoblasts and angiogenesis in human placental compartments / Análisis comparativo de trofoblastos y angiogénesis en compartimentos placentarios humanos

SUMMARY: Trophoblasts perform different functions depending on their location. This study aimed to obtain structural clues about the functions of villous and extravillous trophoblasts by using light and electron microscopy. Term placenta samples were obtained from 10 healthy pregnant women following cesarean sections. Frozen sections were stained with hematoxylin-eosin, semi- thin sections were stained with toluidine blue and examined with a light microscope, while thin sections were contrasted using uranyl acetate-lead citrate and evaluated under an electron microscope. Fine structural features of villous trophoblasts overlapped some villous stromal cells. In addition to the usual appearance of mature capillaries in villous stroma, we demonstrated and reported maturational stages of angiogenetic sprouts in term placenta. Extravillous trophoblasts were classified according to their location: fibrinoid, chorion, trophoblastic, column, maternal vascular endothelium, or decidua. All of these trophoblasts shared some ultrastructural features but also were distinct from each other. In decidua, it was noted that the endothelial lining of some vessels was invaded by a few endovascular trophoblasts with irregular microvilli. These cells shared some ultrastructural properties with both villous trophoblasts and stromal cells. Examination showed that angiogenesis was still present in term placentas and that trophoblasts, endothelial and stromal cells have very similar properties ultrastructurally, suggesting they represent transformational forms.

RESUMEN: Los trofoblastos dependiendo de su ubicación realizan diferentes funciones. Este estudio tuvo como objetivo obtener pistas estructurales sobre las funciones de los trofoblastos vellosos y extravellosos mediante el uso de microscopía óptica y electrónica. Se obtuvieron muestras de placenta a término de 10 mujeres embarazadas sanas después de cesáreas. Las secciones congeladas se tiñeron con hematoxilina-eosina, las secciones semidelgadas se tiñeron con azul de toluidina y se examinaron con un microscopio óptico, mientras que las secciones delgadas se contrastaron con acetato de uranilo-citrato de plomo y se evaluaron con un microscopio electrónico. Las finas características estructurales de los trofoblastos vellosos se superponen a algunas células estromales vellosas. Además de la apariencia habitual de capilares maduros en el estroma velloso, demostramos e informamos etapas de maduración de brotes angiogenéticos en la placenta a término. Los trofoblastos extravellosos se clasificaron según su localización: fibrinoide, corion, trofoblástico, columna, endotelio vascular materno o decidua. Todos estos trofoblastos compartían algunas características ultraestructurales, pero también eran distintos entre sí. En decidua se observó que el revestimiento endotelial de algunos vasos estaba invadido por unos pocos trofoblastos endovasculares con microvellosidades irregulares. Estas células compartían algunas propiedades ultraestructurales tanto con los trofoblastos vellosos como con las células del estroma. El examen mostró que la angiogénesis todavía estaba presente en las placentas a término y que los trofoblastos, las células endoteliales y estromales tienen propiedades ultraestructurales muy similares, lo que sugiere que representan formas de transformación.

Participação dos neutrófilos durante a implantação embrionária no desenvolvimento da placenta em camundongos / Participation of neutrophils during embryonic implantation in the placental development in mice

A implantação do embrião na parede uterina é um processo complexo que consiste na interação do blastocisto com as células epiteliais do útero, e depende de diferentes tipos celulares do microambiente uterino. Embora a literatura mostre a participação de neutrófilos neste processo, os dados ainda são incipientes para proposição da função exata destas células nos períodos iniciais da gestação. Dados do nosso grupo de pesquisa mostraram que neutrófilos pró-angiogênicos induzem a tolerância gestacional, e que a depleção de neutrófilos durante as fases iniciais da gestação prejudica a implantação do blastocisto e a progressão da gestação. Com base nestes resultados, o presente estudo visou investigar se a depleção de neutrófilos na fase pré-receptiva da janela de implantação do blastocisto altera a morfologia placentária. Para tanto, foi utilizado o modelo de gestação alogênica, onde camundongos fêmeas C57BL/6, após cruzamento com machos Balb/C foram tratadas com anticorpo anti-Ly6G ou isotipo no dia 1,5 da gestação (24 horas após a detecção do plug vaginal) em dose suficiente para manter a depleção de neutrófilos circulantes por 48 horas (200µg/ 500µL; i.p). No final da gestação (dia 18,5), o sangue periférico foi coletado e, em seguida, os animais foram submetidos a laparotomia para retirada da placenta, a qual foi submetida à análise histológica. As análises dos leucócitos circulantes evidenciaram a efetividade do tratamento para depleção de neutrófilos periféricos. A análise histológica mostrou alterações significativas na morfologia da placenta nos animais tratados com anti-Ly6G. Foram detectadas a redução da zona juncional, de células trofoblásticas e de fatores angiogênicos, como fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF), e das moléculas de adesão intracelular-1 (ICAM-1) e de plaqueta e endotélio (PECAM-1). Esses dados evidenciam a importância dos neutrófilos nos primeiros dias de gestação para o desenvolvimento da placenta

Blastocyst implantation is a complex process, consisting of the interaction between blastocyst and uterine epithelial cells. Also, it is well known that the implantation site resembles an inflammatory response, with a profusion of recruited immune cells into the endometrial stroma and lumen from the blood. The role of macrophages, natural killers, and dendritic cells have been extensively studied, however, the participation of neutrophils in this process remains unclear. Data from our research group showed that pro-angiogenic neutrophils induced gestation tolerance, also peripheral neutrophils depletion at the time of active placental development led to smaller embryo sizes and abnormal placentation in mice. In this context, the present study aimed to investigate whether pharmacological depletion of neutrophils in mice in the blastocyst implantation phase alters placental morphology. Therefore, C7/BL/6 female mice, after mating with Balb/C males, were treated with an anti-Ly6G antibody or isotype on day 1 of gestation (after detection of the vaginal plug) at a dose sufficient to maintain the depletion of circulating neutrophils for 48 hours (200 µg/500µL; i.p). At the end of the gestational day (day 18), peripheral blood was collected, and then the animals were submitted to laparotomy for the placenta removal and subsequent histological analysis. The analysis of circulating leukocytes from neutrophils depleted mice showed a reduction of peripheral neutrophils up to 48 hours after antibody injection. The histological analysis showed significant alterations in the placenta morphology of the animals treated with anti-Ly6G. The morphometric analyses showed a reduction in the size of neutrophils depleted placenta due to diminished junctional zone and reduction of trophoblast cells. Also, it was observed a reduction of vascular endothelial growth factors (VEGF), reduction of adhesion molecules intracell-1 (ICAM-1), and platelets and endothelium (PECAM-1) positive cells in the junctional zone. In conclusion, these data show the importance of neutrophils on the first days of pregnancy for the development of the placenta

Expresión de calreticulina en placenta canina / Calreticulin expression in canine placenta

La placenta es un anexo embrionario de los mamíferos que tiene por función principal el intercambio de nutrientes y gases y proteger al concepto de un potencial daño inmune provocado por diferencias alogénicas en los Complejos Principales de Histocompatibilidad paternos. Se han descrito diversas proteínas asociadas a su función, siendo Calreticulina una de ellas. Si bien existen estudios de la presencia de Calreticulina en placenta humana, no existen reportes de esta proteína en la placenta canina. Se obtuvieron muestras de placenta canina de las que se extrajo el contenido proteico total y se determinó la presencia de Calreticulina por western blot e inmunohistoquímica. Los resultados mostraron presencia de Calreticulina en placenta canina con un peso molecular aparente de 60 kDa, concordante con lo descrito para la molécula por otros autores. El análisis inmunohistoquímico mostró que Calreticulina canina está presente principalmente en el trofoblasto de las vellosidades, no existiendo diferencias en cuanto a su localización al compararla con placenta humana, pese a sus diferencias morfológicas e histológicas. Esta información permitirá establecer un protocolo estandarizado de extracción de Calreticulina desde placenta, así como orientar acerca de los posibles roles de esta molécula en la placenta.

The placenta is an embryonic organ present in mammals, whose main functions are the exchange of nutrients and gases and to protect the fetus from potential immune damage mediated by paternal and maternal allogeneic differences in the Major Histocompatibility Complex. Several proteins associated with its function have been described, being Calreticulin one of them. Although there are studies on the presence of Calreticulin in human placenta, there are no reports of this protein in canine placenta. Samples from canine placenta were obtained, proteins extracted and Calreticulin was subsequently detected by western blot and immunohistochemistry. The results showed the presence of Calreticulin in canine placenta with an apparent molecular weight of 60 kDa, in agreement with the results from other authors. The immunohistochemical analysis showed that canine Calreticulin is present mainly in the trophoblast of the villi, and there is no difference in its localization when compared with a blood-filled placenta such as human one, despite its morphological and histological differences. We also propose a standardized protocol for the extraction of Calreticulin from placenta, given its abundant expression in this organ. Future studies are aimed at elucidating possible roles of this protein in placenta.

Doença trofoblástica gestacional: correlação ßhCG sérico quantitativo, ultrassonografia e anatomopatologia em serviço de obstetrícia do Ceará / Gestational trophoblastic disease: ßhCG quantitative serum correlation, ultrasonography and pathology in obstetrics service in Ceará

Doença trofoblástica gestacional (DTG) é uma anomalia que engloba formas clínicas benignas (mola hidatiforme completa e parcial) e malignas (mola invasora, coriocarcinoma, tumor trofoblástico do sítio placentário e tumor trofoblástico epitelioide). O objetivo deste estudo é realizar levantamento epidemiológico retrospectivo de prontuários de 40 pacientes internadas entre abril de 2014 e fevereiro de 2016 com hipótese diagnóstica de DTG atendidas no Hospital Regional Norte/ Centro de Apoio à Saúde Reprodutiva da Mulher em Sobral, no Ceará, traçando o perfil de cada paciente (idade, paridade), além de fazer correlação dos parâmetros clínicos, laboratoriais e anatomopatológico. Entre as pacientes que obtiveram o diagnóstico de DTG, observou-se que em torno de 93,33% possuíam exame ultrassonográfico evidenciando possível mola hidatiforme; o anatomopatológico confirmou doença trofoblástica em aproximadamente 52,5% da população estudada. Este estudo é inédito, por ser o primeiro a realizar um levantamento de dados em pacientes com DTG na cidade de Sobral.(AU)

Gestational trophoblastic disease (GTD) is an anomaly that encompasses benign clinical forms (complete and partial hydatidiform mole) and malignant (invasive mole, choriocarcinoma, placental site trophoblastic tumor and epithelioid trophoblastic tumor). The objective of this study was to carry out a retrospective epidemiological survey of medical records of 40 hospitalized patients between April 2014 and February 2016 with diagnostic hypothesis of GTD attended at the Regional Hospital Norte/Center for Support to Women's Reproductive Health in Sobral, Ceará, drawing the profile of each patient (age, parity), in addition to correlating the clinical, laboratory and anatomopathological parameters. Among the patients who had the diagnosis of GTD, it was observed that about 93.33% had ultrasonographic examination evidencing a possible hydatidiform mole; the anatomopathological confirmed trophoblastic disease in about 52.5% of the study population. This study is unprecedented because it is the first to perform a data collection in patients with GTD in the city of Sobral.(AU)

Interacción endometrio trofoblasto, en la implantación humana: revisión de la literatura / Endometrium-trophoblast interaction in human implantation: review of literature

Un embarazo exitoso requiere de una serie de interacciones mediadas por factores hormonales, moleculares y fenómenos de inmunomodulación. Una de estas interacciones es la que ocurre entre el endometrio y el blastocito, previo y durante el proceso de implantación. El objetivo de esta revisión bibliográfica es complementar lo descrito en la literatura clásica de embriología humana sobre interacción de endometrio-blastocito. La búsqueda bibliográfica se realizó en la base de datos MEDLINE usando los términos en inglés "implantation", "endometrium" y "embryo"; además se realizó una búsqueda manual, que incluyó artículos de revistas no indexadas, libros de texto y atlas. Se consideraron criterios de inclusión y exclusión para la selección de los artículos y otros recursos bibliográficos. Entre los criterios de inclusión se consideraron estudios realizados en humanos, artículos de revisión y experimentación, publicados en los últimos 5 años. Como criterios de exclusión se consideraron artículos que utilizaran animales, estudios sobre fertilidad in vitro, patologías asociadas y artículos no relacionados al tema. Una vez completada la selección, se examinaron los textos completos, en los cuales se aplicaron nuevamente los criterios de exclusión. La búsqueda arrojó un total de 560 artículos, cuyo análisis de los títulos y resúmenes resultó en 475 trabajos excluidos, a partir de los diferentes criterios de exclusión antes descritos. Por lo tanto, se obtuvieron 85 artículos, en los cuales se realizó el análisis del texto completo. De estos artículos, se obtuvieron un total de 34 estudios y los contenidos seleccionados en esta revisión fueron: Endometrio, Interacción endometrio trofoblasto, Aposición, Adhesión y Migración-Invasión. Durante la implantación se genera una interacción entre el endometrio y el trofoblasto, con la participación de moléculas reguladoras de proliferación y diferenciación, como factores hormonales, moleculares y de expresión génica. Sin embargo, los mecanismos específicos de acción e interacción deben continuar siendo investigados, para responder interrogantes en el ámbito del crecimiento y desarrollo humano.

A successful pregnancy requires a series of interactions, mediated by hormonal, molecular and immunomodulation phenomena. One of these interactions is between the endometrium and the blastocyst, before and during the implantation process. The objective of this literature review is to complement what is described in the classic human embryology literature on endometrial-blastocyst interaction. The bibliographic search was carried out in the MEDLINE database using the terms "implantation", "endometrium" and "embryo", and a manual search was carried out, which included articles from non-indexed journals, textbooks and atlases. Inclusion and exclusion criteria were considered for the selection of articles and other bibliographic resources, including human studies, review and experimentation articles, published in the last 5 years. Articles with animals as experimental subjects, in vitro fertility studies, associated pathologies and articles not related to the subject were excluded. When the selection was completed, the complete texts were examined, in which the exclusion criteria were applied again The search yielded a total of 560 articles, whose analysis of titles and abstracts resulted in 475 excluded works, in relation to different exclusion criteria described above. Therefore, 85 articles were obtained, in which the complete text analysis was performed. From these articles, a total of 34 studies were obtained and the contents selected in this review were: Endometrium, Endometrium trophoblast, Aposition, Adhesion and Migration-Invasion. During the implantation, aninteraction between the endometrium and the trophoblast is generated, with the participation of regulatory molecules of proliferation and differentiation, such as hormonal, molecular and gene expression factors. However, the specific mechanisms of action and interaction must continue to be investigated, to answer questions in the field of human growth and development.

Histomorphological study of placenta in gestational diabetes mellitus / Estudio histomorfológico de la placenta en diabetes mellitus gestacional

Evidence from the literature shows that well-controlled glucose levels during pregnancy are usually associated with normal placental morphology. The aim of this study was to identify the lacental changes attributed to maternal hyperglycemia. A total of 20 placentae were selected for study from a tertiary care medical center in Makkah city, Saudi Arabia. Out of 20, 10 placentae were from patients diagnosed with GDM based on IADSPG criteria, and 10 placentae were from patients with normal pregnancies without GDM. The morphometric measurements were recorded. The mean weight of GDM placentae were more than the normal placentae. Upon histopathology, significant changes such as syncytial knots, cytotrophoblastic cell proliferation, fibrinoid necrosis, stromal fibrosis, and hyalinized villi were observed in GDM placentae. GDM produces significant morphological alterations in the placentae, which might affect the developing fetus.

La evidencia de la literatura muestra que niveles de glucosa bien controlados durante el embarazo generalmente se asocian con una morfología placentaria normal. El objetivo de este estudio fue identificar los cambios placentarios atribuidos a la hiperglucemia materna. Un total de 20 placentas fueron seleccionadas para un estudio en un centro médico de atención terciaria en la ciudad de La Meca, Arabia Saudita. De 20 placentas, 10 de estas fueron de pacientes diagnosticadas con diabetes mellitus gestacional (DMG) según los criterios de IADSPG, y 10 placentas fueron de pacientes con embarazos normales sin DMG. Las mediciones morfométricas fueron registradas. El peso medio de las placentas GDM fue mayor que la placenta normal. Tras la histopatología, se observaron cambios significativos tales como nudos sincitiales, proliferación celular citotrofoblástica, necrosis fibrinoide, fibrosis estromal y vellosidades hialinizadas en placenta con DMG. La DMG produce alteraciones morfológicas significativas en las placentas, que pueden afectar al desarrollo del feto.

Embarazo ectópico sobre serosa uterina, ¿abdominal primario? / Ectopic uterine serosal pregnancy, primary abdominal?

Se describe el caso de un embarazo ectópico de localización inusual sobre la serosa uterina, en una paciente con resección cornual previa por dos ectópicos consecutivos en dicha zona. De probable implantación abdominal primaria y sin evidencia de comunicación endometrial, fue resuelto con resección del tejido trofoblástico por vía laparoscópica.

The case of an ectopic pregnancy with unusual location on the uterine serosa in a patient with cornual resection after two consecutive ectopic pregnancies in that area is reported. It probably had a primary abdominal implantation without endometrial communication, and was treated with trophoblastic resection by laparoscopy.

Comportamiento de las células asesinas naturales, las dendríticas y los macrófagos, en el embarazo / Behavior of the natural killer cells, dendritic cells and macrophages in pregnancy

La implantación de un embrión semialogénico en el útero materno constituye una paradoja inmunológica y es uno de los fenómenos que abre más interrogantes dentro del campo de la Inmunología. Mientras que en un determinado momento se consideró que la interfase materno-fetal era un sitio inmunológicamente privilegiado, hoy se sabe que ocurre un reconocimiento del feto semialogénico por el sistema inmune de la madre. Sin embargo, a pesar de este reconocimiento inmunológico se han descubierto varios mecanismos que pueden explicar el porqué la madre no rechaza al feto antigénicamente diferente. Estos mecanismos incluyen, tanto factores fetales como factores locales maternos, donde están incluidos los elementos de la respuesta inmunitaria adaptativa e innata. En este trabajo se hace referencia a la importante función que desempeñan las células asesinas naturales, las células dendríticas y los macrófagos en el embarazo(AU)

The implantation of a semiallogenic embryo in the womb is an immunological paradox and is one of the phenomena that open more questions in the field of immunology. While at one point it was considered that the maternal-fetal interface was an immunologically privileged site, now it is known that a fetus semiallogenic recognition by the immune system of the mother occurs. However, despite this immune recognition several mechanisms have been discovered that may explain why the mother does not reject the fetus antigenically different. These mechanisms include both fetal factors and local maternal factors, where the elements of innate and adaptive immune response are included. In this paper we refer to the important role of natural killer cells, dendritic cells and macrophages in pregnancy(AU)

Trofoblasto, impronta y conflicto genómico en gineco-obstetricia / Trophoblast, imprinting and genomic conflict in gynecology-obstetrics

La teoría del Conflicto Genómico es parte de la biología evolutiva y actúa en los mamíferos a través del mecanismo de impronta genética, estos genes cumplen un rol central en el desarrollo fetal y del trofoblasto contribuyendo a un balance entre los requerimientos nutricionales fetales (genes con impronta paterna) y el aporte materno (genes con impronta materna). El desbalance de estos genes tiene implicancias en la etiopatogenia de diversas patologías en Gineco-Obstetricia: en Medicina Fetal (preeclampsia, diabetes gestacional, síndrome de Beckwith-Wiedemann), oncología (mola completa, mola incompleta, teratomas) y fertilidad. Se presenta un caso de displasia mesenquimática placentaria asociado a Beckwith-Wiedemann.

The theory of Genomic Conflict is part of evolutionary biology and acts in mammals through the mechanism of genetic imprinting, these genes play a central role in fetal and trophoblastic development producing a balance between fetal nutritional requirements (genes with paternal imprinting) and maternal supply (genes with maternal imprinting). The imbalance of these genes has implications in the pathogenesis of various diseases in Obstetrics and Gynecology: in Fetal Medicine (preeclampsia, gestational diabetes, Beckwith-Wiedemann syndrome), oncology (complete and partial hydatiform mole, teratomas) and fertility. A case of placental mesenchymal dysplasia associated with Beckwith-Wiedemann is presented.

Unusual combination of gestational trophoblastic neoplasias: case report / Combinação rara de neoplasias trofoblásticas gestacionais: caso clínico

Gestational trophoblastic disease comprises a heterogeneous group of lesions arising from abnormal proliferation of trophoblastic cells. An elevation of human chorionic gonadotropin after evacuation of a molar pregnancy should suggest the hypothesis of a persistent gestational trophoblastic neoplasia. We present a rare case of coexistence of choriocarcinoma and placental-site trophoblastic tumor in the same tumor, whose diagnosis was made based on the correlation of morphological, microscopic and immunocytochemical studies, due to the difficulty in diagnosing these mixed tumors based on conventional histology only.

A doença trofoblástica gestacional compreende um grupo heterogêneo de lesões decorrentes da proliferação anormal de células trofoblásticas. A elevação da subunidade beta da gonadotrofina coriônica humana (β-hCG) após a evacuação de uma gravidez molar levanta a hipótese diagnóstica de neoplasia trofoblástica gestacional persistente. Apresentamos um caso raro de coexistência de coriocarcinoma e tumor trofoblástico do leito placentário em um mesmo tumor, cujo diagnóstico foi efetuado com base na correlação dos estudos morfológicos, microscópicos e imuno-histoquímicos, dada a dificuldade de diagnosticar esses tumores mistos com base apenas no exame histológico convencional.

Desarrollo placentario temprano: aspectos fisiopatológicos

El éxito de la gestación humana es el resultado de una sucesión de procesos que se dan en forma coordinada en tiempo y espacio en la interfase materno, placentario, embrionario-fetal. El fallo de esta sucesión de procesos determina una inadecuada placentación, preeclampsia y restricción del crecimiento intrauterino. En este artículo se revisa aspectos fisiopatológicos del desarrollo placentario temprano.

Successful human pregnancy is the result of a series of processes that occur in a coordinated manner in time and space in the embryonic, placental, fetal-maternal interface. Failure of these series of processes determines inadequate placentation, preeclampsia and intrauterine growth restriction. Pathophysiological aspects of early placental development are reviewed in this article.

Igf-ii y la gonddotropina coriónica regulan la roliferación, migración e invassión de células de trofoblasto humano / IGF-II and Chorionic Gonadotropin Regulate Proliferation, Migration and Invasion of Human Trophoblast Cells

Son conocidas las propiedades del factor de crecimiento similar a la insulina tipo II (IGF-II) y de la hormona gonadotropina coriónica (hCG) en implantación y migración trofoblástica; sin embargo, los mecanismos moleculares a través de los cuales ejercen sus efectos no están completamente caracterizados. El objetivo de este estudio fue establecer la interacción potencial entre los efectos funcionales de hCG e IGF-II en la regulación de la proliferación, migración e invasión trofoblástica. Utilizando la línea celular HTR-8/SVneo de trofoblasto extravelloso se estableció que IGF-II promueve la proliferación celular y de manera novedosa se demostró que hCG, a concentraciones elevadas, es capaz de estimular la proliferación trofoblástica, a través de un mecanismo independiente al empleado por IGF-II. En contraste, la capacidad invasiva del trofoblasto fue regulada por IGF-II y hCG, planteando la existencia de un efecto aditivo en sus acciones. En conclusión, nuestros resultados demuestran el papel de hCG e IGF-II en la regulación de la proliferación e invasión del trofoblasto y plantean la existencia de interacciones a nivel de sus acciones biológicas, contribuyendo a un mejor entendimiento de la biología del trofoblasto y sus patologías.

Both IGF-II and chorionic gonadotropin (hCG) are important regulators of human trophoblast migration and implantation; however the molecular mechanisms are not fully understood. The purpose of this study was to determine the potential cross-talk between functional effects of hCG and IGF-II in the regulation of trophoblast proliferation, migration and invasion. Using the HTR-8/SVneo trophobast cell line we found that IGF-II stimulates cell proliferation and, for the first time we demonstrate that hCG at high doses is able to promote trophoblast proliferation through a mechanism independent of IGF-II. In contrast, trophoblast invasiveness was regulated by both IGF-II and hCG and an additive effect between the two hormones was observed. In conclusion, our results demonstrate cross-talk between the biological activities of IGF-II and hCG in the regulation of trophoblast invasiveness and contribute to a better understanding of the trophoblast biology and pathology.

El igf-ii estimlla la actividad de mmp-9 y mmp-2 en un modelo de trofoblasto humano / IGF-II Stimulates MMP-9 and MMP-2 Activity in a Human Trophoblast Model

La invasión del útero por el trofoblasto extravelloso de placenta de primer trimestre (EVCT) depende de la secreción de metaloproteasas de matriz (MMPs) que degradan la matriz extracelular y dentro de las cuales las gelatinasas MMP-9 y MMP-2 juegan un papel muy importante. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de los ligandos del sistema de factores de crecimiento similares a la insulina (IGF) en la actividad de gelatinasas en una línea celular establecida de trofoblasto extravelloso invasivo, HTR8/SVneo. Mediante ensayos de zimografía se encontró que el tratamiento con IGF-II 10 nM estimula la actividad de proMMP-9 y proMMP-2 con un máximo a las 24 horas. Dosis mayores de IGF-II mostraron un efecto inhibitorio en la actividad proteasa. Adicionalmente, el IGFII 10 nM estimuló la actividad de otras dos gelatinasas no identificadas de peso molecular 52 kDa tras tratamiento por 24 horas. Ni la insulina ni el IGF-I en concentraciones 10 nM mostraron un efecto estimulador en la actividad de las gelatinasas. Estos resultados muestran el papel potencial del sistema IGF en la regulación de la invasión celular y ayudan a comprender el desarrollo del crecimiento maligno.

Invasion of the uterus by first trimester placental extravillous trophoblast (EVT) cells depends on matrix metalloproteinase (MMPs) secretion to degrade the extracellular matrix; among these, MMP-2 and MMP-9 gelatinases play a pivotal role. The aim of this work was to determine the effect of ligands of the insulin-like growth factor system (IGF) on gelatinase activity in HTR8/Svneo cells, a well-established invasive extravillous trophoblast cell line. By zymography assay, we found that treatment with 10 nM IGF-II stimulates proMMP-9 and proMMP-2 activity with a peak at 24 hours, whereas higher IGF-II doses showed an inhibitory effect on the protease activity. Additionally, IGF-II stimulation resulted in the activation of two other gelatinases, with MW around 52 kDa, which remain to be identified. Neither insulin nor IGF-I were able to stimulate the activity of gelatinases at the time and doses utilized in this study. These results support the potential role of the IGF system in the regulation of cell invasion and malignant growth.

Histochemical study of early embryo implantation in rats / Estudio histoquímico de la implantación temprana en ratas

Embryo implantation is the process that results in attachment of the conceptus to the uterine wall. In this histochemical study, we investigated the early stage of embryo implantation in rats by morphological analysis and by the detection of total proteins and glycosaminoglycans using hematoxylin-eosin, toluidine blue at pH 4.0 (TB), and Xylidine Ponceau at pH 2.5 (XP). In non-pregnant females, the uterine layers could be clearly distinguished and showed the normal histology of the organ. In pregnant females, an increase in the number of cells and a reduction in the interstitial space were observed in the endometrium close to the implantation sites. The blastocyst was partially inserted in the endometrium, with the observation of the inner cells mass around the blastocyst cavity surrounded by trophoblastic cells. TB staining revealed mild metachromatic basophilia, which was more evident in the endometrial stroma around the implantation site. Histochemical staining with XP was also more intense in the stroma close to the site of implantation. On the other hand, histochemical staining with either TB or XP was more discrete at sites distant from the conceptus. This study demonstrated changes in the endometrial stroma in areas adjacent to the site of embryo implantation, with variations in glycosaminoglycans and proteins as demonstrated by the detection of anionic and cationic radicals, respectively.

La implantación embrionaria es el proceso que resulta en la unión del embrión a la pared uterina. En este estudio histoquímico, se determinó la fase inicial de implantación del embrión en ratas mediante el análisis morfológico y por la detección de proteínas totales y glicosaminoglicanos con hematoxilina-eosina, azul de toluidina a pH 4,0 (TB) y xilidina Ponceau a un pH de 2,5 (XP). En las hembras no preñadadas, las capas del útero pueden ser claramente distinguidas y mostraron la histología normal del órgano. En las hembras preñadas, se observa un incremento en el número de células y una reducción en el espacio intersticial del endometrio para cerrar los sitios de implantación. El blastocisto se implanta parcialmente en el endometrio, con presencia de masa de células internas en torno a la cavidad del blastocisto, rodeado por las células trofoblásticas. La tinción TB reveló leve basofilia metacromática, lo cual fue más evidente en el estroma endometrial alrededor del sitio de implantación. Tinción histoquímica con XP también fue más intensa próximo del estroma en el sitio de implantación. Por otro lado, la tinción histoquímica, ya sea con la tuberculosis o XP fue más leve en los lugares distantes del embrión. Este estudio demostró cambios en el estroma del endometrio en las zonas adyacentes al sitio de la implantación del embrión, con variaciones en glucosaminoglicanos y proteínas, como lo demuestra la detección de radicales aniónicos y catiónicos, respectivamente.

A quantitative assessment of the morphological characteristics of BeWo cells as an in vitro model of human trophoblast cells / Una evaluación cuantitativa de las características morfológicas de las células BeWo como un modelo in vitro de las células de trofoblasto humano

In order to study the detailed morphology of trophoblast cells during human implantation, BeWo cells were cultured as spheroids in suspension culture. These cultures were then processed for light and electron microscopical examination. The present study showed that the BeWo spheroids consist of two cell types which are cytotrophoblast-like and syncytiotrophoblast-like. The cells with larger nuclear diameter made up only about 1 percent of the cell population and appear to be those of syncytiotrophoblast. Therefore the predominant cell type of the BeWo spheroids appeared to be relatively undifferentiated and cytotrophoblast-like. About 10 percent of the BeWo cells in the present study were mitotic, indicating a highly proliferative population. Total cell number increased about 12 times during the culture period from 107 +/- 9 on day 1 to 1211 +/- 145 on day 7 whereas the volume per cell increased about 2 times, from 1300 um3 on day 1 to 2400 um3 on day 7. Therefore overall growth of BeWo spheroids is due to both hyperplasia and hypertrophy. However, it appears that cell proliferation outstrips volumetric growth. These quantitative data show that BeWo cells grow mainly by hyperplasia and provide baseline values for further studies. In addition, the results show that BeWo cell morphology has marked similarities to that reported for human trophoblast, making it a useful model for subsequent in vitro studies.

En un cultivo de suspensión se estudió la morfología de las células durante la implantación del trofoblasto humano, células BeWo. Estos cultivos fueron procesados y examinados a través de microscopía de luz y electrónica. El estudio mostró que los esferoides BeWo constan de dos tipos de células, citotrofoblasto y sincitiotrofoblasto. Las células con mayor diámetro nuclear parecen ser los sincitiotrofoblasto que representaban sólo el 1 por ciento de la población celular. Por tanto, el tipo celular predominante de los esferoides BeWo parecían ser relativamente indiferenciados como citotrofoblasto. Alrededor del 10 por ciento de las células BeWo fueron mitóticas, lo que indica una población altamente proliferativa. El número de células totales aumentó alrededor de 12 veces durante el período de cultivo de 107 +/- 9 días en el día 1 a 1211 +/- 145 en el día 7, mientras que el volumen de la célula creció alrededor de 2 veces, desde 1300 mm3 el día 1 hasta 2400 mm3 el día 7. Por lo tanto, el crecimiento global de esferoides BeWo se debe tanto a la hiperplasia como a la hipertrofia. Sin embargo, parece que la proliferación celular supera al crecimiento volumétrico. Estos datos cuantitativos muestran que las células BeWo crecen principalmente por hiperplasia y proporcionan valores de referencia para estudios posteriores. Además, los resultados muestran que la morfología celular BeWo ha marcado similitudes con los reportado para el trofoblasto humano, por lo que es un modelo útil para posteriores estudios in vitro.

Fisiopatologia da pré-eclâmpsia / Pathophysiology of preeclampsia

A pré-eclâmpsia é uma complicação da gravidez que ocorre no terceiro trimestre de gestação e é específica da gravidez humana. Ela é secundária a uma disfunção placentária, a qual é responsável pela liberação na circulação materna de diversas substâncias responsáveis por ativação e até lesão do endotélio materno, tendo como consequências hipertensão arterial, nefropatia glomerular e aumento da permeabilidade vascular. Trabalhos recentes têm permitido melhor compreensão da fisiopatologia desta patologia, com a esperança de desenvolver novos instrumentos de detecção e possíveis perspectivas terapêuticas. Este artigo ilustra os mecanismos fisiopatológicos da revascularização uterina defeituosa, da disfunção placentária e da disfunção endotelial que ocorrem no decurso da pré-eclâmpsia.

Microscopía electrónica de barrido de la hiperplasia en la vellosidad molar / Scanning electron microscopy of placental hyperplasia

Objetivo: Estudio de la superficie externa del sincitiotrofoblasto de vesículas de mola hidatidiforme, fue rastreada utilizando la microscopía electrónica de barrido. Método: Especimenes de material molar de 21 semanas de embarazo se fjaron en 2 por ciento de glutaraldehido 0,1 M a 4ºC en sala de parto y posteriormente post fjados en 1 por ciento de tetraoxido de osmio siguiendo los procedimientos convencionales de la microscopía electrónica de barrido como deshidratación, desecado de punto crítico, cubrimiento iónico y observación con el microscopio electrónico de barrido. Resultados: Los resultados revelan cambios morfológicos en la membrana plasmática sincitial, desde superfcie aplanadas con pequeños gránulos o promontorios, hasta la formación de numerosas prolongaciones de membrana que originan pliegues, bandas o columnas, las cuales se ramifcan intensamente, tomando contacto entre sí para conformar una complicada trama, que deja un retículo de espacios como cavernas, las cuales se abren hacia el espacio intervelloso siendo la expresión de una intensa proliferación de membranas en hiperplasia. Conclusión: La observación de esta trama permite un mejor entendimiento de la estructura de la mola comparada con las imágenes de microscopía de luz.

Objective: Study of the external surface of the syncytiotrophoblast in vesicles of hydatidiform mole was examined and analysed using scanning electron microscopy. Method: Vesicles of molar material were taken at 21 weeks of pregnancy and fxed in 2 percent of glutaraldehyde 0.1 M at 4 °C in delivery room and furtherly post-fxed in 1 percent of tetroxide of osmium according with conventional procedures of the scanning electron microscopy as dehydration, critical point drying, surface coating and examination using scanning electron microscope. Result: The fndings reveal the morphological changes in the syncytial membrane from smooth surface with small bridges or granules to the formation of numerous prolongations of plasma membrane, which produce folds, bands or columns with ramifcations, that get in touch organizing a complex net that contain spaces opened to the intervillous space. This is an expression of the proliferation of syncytial plasma membrane during the hyperplasia. Conclusion: The tridimensional observation of this net complex permit a better understanding of the structure of the molar vesicle when these images are compared with those of light microscopy.

LA ACTIVACIÓN DE LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN PI3K/AKT POR EL FACTOR DE CRECIMIENTO SIMILAR A LA INSULINA TIPO II ESTIMULA LA EXPRESIÓN DEL mARN DE LA METALOPROTEINASA 9 EN CÉLULAS DE CORIOCARCINOMA / ACTIVATION OF THE PI3K/AKT SIGNALLING PATHWAY BY INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR TYPE II STIMULATES METALLOPROTEINASE 9mRNA EXPRESSION IN CHORIOCARCINOMA CELLS / PERCURSO SINALIZAÇÃO PI3K/AKT ACTIVADO POR INSULINA-COMO FACTOR DE CRESCIMENTO TIPO II ESTIMULA METALOPROTEINASE 9 mARN EXPRESION CORIOCARCINOMA EM CÉLULAS

Las metaloproteinasas 2 y 9 (MMP-2 y MMP-9) y el inhibidor-1 de MMP (TIMP-1) podrían contribuir a la regulación del comportamiento invasivo de las células trofoblásticas, efecto que podría ser mediado por el factor de crecimiento similar a la insulina tipo II (IGF-II), el cual regula el desarrollo y la función del trofoblasto en la interfase materno-fetal. El objetivo de este estudio fue investigar el rol de la vía de señalización PI3K/AKT activada por IGF-II en la expresión de MMP-2 y MMP-9 involucradas en el proceso de invasión en la línea celular JEG-3, de coriocarcinoma humano. La expresión del mARN de MMP-2, MMP-9 y TIMP-1 fue evaluada, en dichas células, por la técnica de RT-PCR empleando diferentes dosis de IGF-II y diferentes condiciones, mientras que la vía de señalización fue evaluada usando la técnica de Western blot. Se encontró que el IGF-II no contribuye a la proliferación de las células trofoblásticas; sin embargo, este promueve la expresión del mARN de MMP-9 y TIMP-1 pero no de MMP-2, de forma dependiente de la dosis. El efecto en la expresión de MMP-9 es mediado a través de IGF-II por la activación de la vía de señalización PI3K/ AKT después de la fosforilación del receptor de IGF-I (IGF-IR). De acuerdo con los resultados, se propone un modelo en el cual la interacción de IGF-II con IGF-IR conduce a la activación de PI3K/AKT y la subsecuente expresión y activación de MMP-9. Esta activación es un requisito esencial para el proceso invasivo.

Metalloproteinases 2 and 9 (MMP-2 and MMP-9) and TissueInhibitor-1 ofMMPs (TIMP-1) could contribute to regulate the invasive behaviour of trophoblastic cells, effect which could be mediated by Insulin-like growth factor type II (IGF-II), which regulates the development and function of trophoblast at the foetal-maternal interface. The aim of this study was to investigate the role of the PI3K/AKT signalling pathway activated by IGF-II in the expression of MMP-2 and MMP-9 involved in the invasion process in the human choriocarcinoma cell line JEG-3. MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 mARN expression in those cells were evaluated by RT-PCR using different IGF-II doses and conditions while signalling pathway was evaluated using Western blot. It was found that IGF-II does not contribute to trophoblastic cells proliferation, however, it promotes mARN expression of MMP-9 and TIMP-1, but not of MMP-2, in a dose-dependent way. The effect on MMP-9 expression is mediated through IGF-II activation of PI3K/AKT signalling pathway after phosphorylation of the IGF-I receptor (IGF-IR). According with the results a model is proposed in which the interaction of IGF-II with IGF-IR leads to PI3K/AKT activation and subsequent expression and activation of MMP-9. This activation is an essential requirement for the invasive process.

As metaloproteinasas 2 y 9 (MMP-2 y MMP-9) e o inibidor-1 de MMPs (TIMP-1) poderiam contribuir à regulação do comportamento invasivo das células trofoblásticas, efeito que poderia ser mediado pelo Factor de Crescimento Similar à Insulina tipo II (IGF-II), o qual regula o desenvolvimento e função do trofoblasto na interface materno-fetal. O objectivo deste estudo foi investigar o papel da via de sinalização PI3K/AKT activada por IGF-II na expressão de MMP-2 e MMP-9 envolvidos no processo de invasão na linha celular JEG-3, de coriocarcinoma humano. A expressão do mARN de MMP-2, MMP-9 y TIMP-1, foi avaliada, em ditas células, pela técnica de RT-PCR utilizando diferentes doses de IGF-II e diferentes condições, enquanto que a via de sinalização foi avaliada usando a técnica de Western-blot. Foi encontrado que o IGF-II não contribui à proliferação das células trofoblásticas, no entanto, este promoveu a expressão do mARN de MMP-9 e TIMP-1 mas não de MMP-2, de forma dependente da dose. O efeito na expressão de MMP-9 é mediado através de IGF-II pela activação da via de sinalização PI3K/AKT depois da fosforilação do receptor de IGF-I (IGF-IR). De acordo aos resultados é proposto um modelo, no qual a interacção de IGF-II com IGF-IR conduz à activação de PI3K/AKT e à subsequente expressão e activação de MMP-9. Esta activação é um requisito essencial para o processo invasivo.

HLA-G:: ¿molécula inductora de inmunotolerancia? / HLA-G molecule as inductor of immunotolerance

Las moléculas HLA-G son antígenos HLA de clase I "no clásicos" del sistema principal de histocompatibilidad. Existen 6 isoformas del gen HLA-G que codifican 4 proteínas unidas a membrana (HLA-G1, HLA-G2, HLA-G3, HLA-G4) y 3 isoformas solubles (HLA-G5, HLA-G6, HLA-G7). Las primeras se expresan en células del citrofoblasto extravelloso de la placenta, células epiteliales del amnio, células endoteliales fetales, macrófagos del mesénquima de las vellosidades coriónicas y en las células epiteliales de la médula del timo; las segundas en el líquido amniótico, en la sangre periférica materna y en la de cordón. Se ha observado expresión HLA-G en varios tipos de tumores, células de estroma durante condiciones de inflamación, células infectadas por virus y en el suero de pacientes trasplantados. Existen fuertes evidencias del papel de las moléculas HLA-G en la inducción de tolerancia en estas situaciones fisiológicas y patológicas, a través de la supresión de la actividad lítica de las células NK y los linfocitos T citotóxicos. Este conocimiento puede ser de gran utilidad en el manejo terapéutico futuro de estas entidades, así como para favorecer el éxito del trasplante de órganos y tejidos.

HLA-G are molecules are «non-classic¼ class I antigens from main histocompatibility system. There are sis isoforms of HLA-G antigen codifying four proteins united to a membrane (HLA-G1, HLA-G2, HLA-G3, HLA-G4), and three soluble isoforms (HLA-G5, HLA-G6, HLA-G7). The first ones are expressed in cells of placental extravillous cytotrophoblast (Langhans' layer), amnios epithelial cells, fetal endothelial cells, mesenchymal macrophages of chorionic villi, and in epithelial cells of thymus medulla; the second ones in amniotic fluid, in maternal peripheral blood and that of the umbilical cord. There was a HLA-G expression in some types of tumors, stroma cells under inflammation conditions, virus-infected cells and in serum of transplant patients. There are strong evidences of HLA-G molecules role in tolerance induction to these physiological and pathological situations through suppression of lithic activity of NK cells and of cytotoxic T lymphocytes. This knowledge may be very useful in future therapeutical management of these entities as well as to favor the success of tissue and organ transplant.